Alkaliskt proteas
  • Alkaliskt proteasAlkaliskt proteas

Alkaliskt proteas

Alkaline Protease bör förvaras på torra, svala och väl ventilerade platser borta från solen, värmen.

skicka förfrågan

produkt beskrivning


Tillämpning och princip

Detta alkaliska proteas används för att bestämma proteasaktivitet, uttryckt som PC-enheter, av beredningar härledda från Bacillus subtilis var. och Bacillus licheniformis var. Analysen är baserad på en 30 minuters proteolytisk hydrolys av kasein vid 37 ° och pH 7,0. Ohydrolyserat kasein avlägsnas genom filtrering och det solubiliserade kaseinet bestäms spektrofotometriskt.


Reagenser och lösningar av alkaliskt proteas
Kasein Använd karmin av Hammarsten-klass (United States Biochemical Corp., katalognummer 12840 eller motsvarande).
Trisbuffert (pH 7,0) Lös 12,1 g enzym (eller motsvarande) tris (hydroximetyl) aminometan i 800 ml vatten och titrera med 1 N saltsyra till pH 7,0. Överför till en 1000 ml mätkolv, späd till vatten med vatten och blanda.
TCA-lösning Lös upp 18 g triklorättiksyra och 19 g natriumacetattrihydrat i 800 ml vatten i en 1000 ml mätkolv, tillsätt 20 ml isättika, späd till volym med vatten och blanda.
Substratlösning Lös upp 6,05 g enzym-tris (hydroximetyl) aminometan i 500 ml vatten, tillsätt 8 ml 1 N saltsyra och blanda. Lös upp 7 g kasein i denna lösning och värm upp i 30 minuter i ett kokande vattenbad under omrörning ibland.
Kyl till rumstemperatur och justera till pH 7,0 med 0,2 N saltsyra, tillsätt syran långsamt under kraftig omrörning för att förhindra utfällning av kaseinet. Överför blandningen till en 1000 ml mätkolv, späd till volym med vatten och blanda.

Provberedning med Tris Buffer, bered en lösning av provenzympreparatet så att 2 ml av den slutliga utspädningen innehåller mellan 10 och 44 bakteriella proteasenheter.


Förfarande för alkaliskt proteas
Pipettera 10,0 ml av substratlösningen i var och en av en serie 25- × 150 mm provrör, vilket möjliggör ett rör för varje enzymtest, ett rör för varje enzymämne och ett rör för ett substratämne. Jämvikt rören i 15 minuter i ett vattenbad som hålls vid 37 ° ± 0,1 °.
Starta stoppuret vid noll tid, pipettera snabbt 2,0 ml av provberedningen i det jämviktade substratet. Blanda och sätt tillbaka rören i vattenbadet. Tillsätt 2 ml Tris-buffert (istället för provberedningen) till substratämnet. Efter exakt 30 minuter, tillsätt 10 ml TCA-lösning till varje enzyminkubation och till substratämnet för att stoppa reaktionen. Värm rören i vattenbadet i ytterligare 30 minuter så att proteinet koagulerar helt.
Vid slutet av den andra uppvärmningsperioden, skaka varje rör kraftigt och filtrera genom 11 cm Whatman nr. 42, eller motsvarande, filterpapper, kasta de första 3 ml filtratet.
[Obs: Filtratet måste vara helt klart.]
Bestäm absorbansen för varje provfiltrat i en 1 cm-cell, vid 275 nm, med en lämplig spektrofotometer, med hjälp av filtratet från substratämnet för att sätta instrumentet till noll. Korrigera varje avläsning genom att subtrahera lämplig enzymavläsning och registrera det så erhållna värdet som AU.

Standardkurvaöverföring 100,0 mg L-tyrosin, kromatografisk kvalitet eller motsvarande (Aldrich Chemical Co.), som tidigare torkats till konstant vikt, till en 1000 ml mätkolv. Lös upp i 60 ml 0,1 N saltsyra. När den är helt upplöst, späd lösningen till volym med vatten och blanda noggrant. Denna lösning innehåller 100 µg tyrosin i 1,0 ml. Förbered ytterligare tre spädningar från denna stamlösning så att den innehåller 75,0, 50,0 och 25,0 µg tyrosin per ml. Bestäm absorbansen för de fyra lösningarna vid 275 nm i en 1 cm cell på en lämplig spektrofotometer kontra 0,006 N saltsyra. Förbered en plot av absorbans kontra tyrosinkoncentration.


Beräkning av alkaliskt proteas
En bakteriell proteasenhet (PC) definieras som den kvantitet enzym som producerar ekvivalenten 1,5 | ig / ml L-tyrosin per minut under analysförhållandena.
Från standardkurvan och genom interpolering, bestäm absorbansen för en lösning med en tyrosinkoncentration på 60 µg / ml. En siffra nära 0,0115 bör erhållas. Dela det interpolerade värdet med 40 för att erhålla absorbansen som motsvarar den för en lösning med en tyrosinkoncentration på 1,5 µg / ml och registrera värdet som härigenom härleds som AS.
Beräkna aktiviteten för provenzympreparatet med ekvationen

PC / g = (AU / AS) × (22 / 30W)

i vilken 22 är den slutliga volymen, i ml, av reaktionsblandningen; 30 är tiden, i min, för reaktionen; och W är vikten, i g, av det ursprungliga provet.

Förpackning och lagring av alkaliskt proteas

Förpackningspåse för fast mat, 25 kg / fat.


Alkaline Protease bör förvaras på torra, svala och väl ventilerade platser borta från solen, värmen.

Betalning:T / T, Paypal, Western Union, Alibaba Trade Assurance, VISA, MasterCard, e-Checking, Pay Later, LC och etc.

Heta etiketter: Alkaliskt proteas, tillverkare, leverantörer, grossist, köp, fabrik, anpassat, i lager, bulk, gratisprov, varumärken, Kina, tillverkat i Kina, billigt, rabatt, lågt pris, köp rabatt, pris, prislista, offert, GMP, Kvalitet, senaste säljning, två års hållbarhet

relaterade kategori

skicka förfrågan

Vänligen gärna ge din förfrågan i formuläret nedan. Vi kommer att svara dig om 24 timmar.